ADN recombinante

Recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

En la naturaleza, pocas especies bacterianas son capaces de captar ADN foráneo de forma natural mediante la transformación, transducción o conjugación de genes, algunos estudios describen como sucede la transformación de las bacterias y cómo los transposones, integrones o casetes de genes se mueven horizontalmente. Un ejemplo de esto es la Escherichia coli ya que al exponerse a antibióticos induce a la mutagénesis por inducción de señales SOS, lo que le confiere una alta probabilidad de adquirir resistencia.

URL: 

1. http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0121-74882018000200009

2. https://dialnet.unirioja.es/servlet/tesis?codigo=212171

ADN recombinante artificial en el Insulinoma

Insulinoma es un tumor de las células β del páncreas que hipersecreta insulina. Un estudio demuestra que la asprosina induce la apoptosis en esas células a través de la regulación de la autofagia. Las células MIN6 de insulinoma de ratón se dividieron en cuatro grupos: grupos de control, vehículo, glucosa alta y asprosina. Las células MIN6 en el grupo de asprosina se transfectaron con el vector asprosina-T2A-GFP recombinante. Como AMPK es inhibida por la asprosina, usamos el agonista AICAR de AMPK. Confirmando que el asprosin podría contribuir a la apoptosis de las células β al inhibir la autofagia a través de la vía  AMPK/mTOR.

T: La asprosina promueve la apoptosis de las células β al inhibir la autofagia a través de AMPK-vía mTOR

O: Determinar si la asprosina induce la apoptosis en las células β de las células MIN6 de insulinoma de ratón a través de la regulación de la autofagia.

ER: no especifíca 
EL :no especifíca

G: Gen que codifica para asprosina. 

V: pcDNA3.1-T2A-GFP.

CR: Eucariota: célula MIN6 

MTG: Transfección

MIC: - Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real, Western blot y cultivo. 

URL: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1002/jcp.29835

Técnica de hibridación en la colecistitis: Western Blot

Se realiza el análisis de Western Blot para evaluar el nivel de visfatina sérica como factor pronóstico para predecir la gravedad de la inflamación en la colecistitis. 

Las células epiteliales y las muestras de la vesícula biliar se lisaron usando el kit de lisis EzRIPA y se cuantificaron con el reactivo de Bradford. Las proteínas se visualizaron por análisis western usando anticuerpos primarios a 4 ℃ y luego anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa de rábano picante durante 1 hora a 25℃. Los anticuerpos primarios utilizados incluyen visfatina, F4/80 y β-actina. El análisis mostró que en la colecistitis crónica, los niveles de expresión de visfatina y F4/80 no difirieron significativamente entre tejidos muy inflamados y no inflamados. Sin embargo, en la colecistitis aguda, los niveles de visfatina y F4/80 fueron significativamente más altos en tejidos muy inflamados que en tejidos muy no inflamados.

 URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7332317/

Prueba PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) para la colecistitis

Tema: Expresión de MUC en tejidos epiteliales de la vesícula biliar en la enfermedad de la vesícula biliar asociada al colesterol

Objetivo: Identificar varios genes de mucina en las células epiteliales de la vesícula biliar, enfocado en la expresión de MUC3 y MUC5B en la colecistitis mediante una reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR)

Tipo de Muestra: Tejidos epiteliales de la vesícula biliar.

Tipo de Ácido Nucleico: ARN total

Genes: Genes MUC3, MUC5AC, MUC5B y MUC6.

Tipo de PCR: Reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR)

Visualización: Electroforesis: Los productos de la PCR se visualizan en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio (0,5 µg / ml).

URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5003211/

Alteraciones de la Epigenómica en la Colecistitis

La hipermetilación de regiones promotoras es un mecanismo epigenético frecuente, la irritación celular crónica podría ser responsable de la activación de enzimas intracelulares implicadas en la hipermetilación de la región promotora de genes supresores de tumores o reguladores del ciclo celular. 

Estudios informaron sobre la metilación de la región promotora del gen APC con un aumento progresivo en el nivel del estado de metilación de varios genes en la colecistitis crónica. SHP1 también estaba metilado en el 88% de las muestras de colecistitis crónica, se sabe que la proteína SHP1 codificada por el gen PTPN6 modula la señalización de los receptores de la superficie celular fosforilados con tirosina, como KIT y EGFR.

URL: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1743919118306526?via%3Dihub

Alteración de la Traducción en la Colecistitis

Se ha demostrado que existe una sobreexpresión de MUC3, MUC5AC, MUC5B y MUC6 en la bilis de pacientes con colecistitis con aumentos significativos en MUC3 y MUC5B, mediante una PCR con transcripción inversa se puede comprobar la sobreexpresión del ARNm de estos dos genes, esto contribuye a la nucleación de cristales de colesterol, hipersecreción de mucina en el epitelio de la vesícula biliar y una alza en pólipos de colesterol dando como resultado una inflamación de la vesícula biliar.

URL: https://www.gutnliver.org/journal/view.html?pn=myread&uid=958&vmd=Full

Alteraciones de la transcripción en la colecistitis

Se ha identificado un locus genético específico fuertemente asociado con el desarrollo de colecistitis, y su asociación es independiente de la edad, el sexo y la obesidad, se encuentra en el cromosoma 5p15 (posición 13,263,374-13,334,195) en una región sin codificación, dicha región está cerca de las regiones de codificación de DNAH5 y LOC105374660, ambos se expresan en la vesícula biliar, aunque la función de LOC105374660 no se conoce, la función de DNAH5 está bien caracterizado.

La transcripción reducida de DNAH5 podría conducir a una eliminación deficiente de estímulos proinflamatorios y bacterias, lo que podría activar la cascada inflamatoria que causa la colecistitis.

URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32118827/

Alteraciones de la genómica en la Colecistitis

El factor genético puede desempeñar un papel en la causa de la enfermedad porque alrededor del 50%-70% de los pacientes con colecistitis tienen antecedentes familiares positivos de la enfermedad. Se ha demostrado el papel del cromosoma 6 en la enfermedad de la vesícula biliar mediante la tipificación de HLA.

Los antígenos leucocitarios humanos (HLA) es uno de los factores genéticos que predisponen a la colecistitis, el HLA-DRB1 * 0301, como factor genético, parece tener una asociación con la colecistitis, HLA-DR es un receptor principal de la superficie celular de clase II del complejo de histocompatibilidad que se regula al alza en respuesta a la señalización durante una infección. Por lo tanto, la disminución del antígeno leucocitario humano-DR conduce a un aumento de la inflamación de la vesícula biliar y la sepsis.

URL: https://www.researchgate.net/profile/Batool-Mahdi-2/publication/317151075_Immunogenetic_Basis_of_Cholecystitis/links/592cd3baaca27295a8159fba/Immunogenetic-Basis-of-Cholecystitis.pdf